原理
葡萄糖在熱醋酸溶液中與鄰甲苯胺縮合生成藍色西夫氏堿(schiff base),顏色的深淺與葡萄糖含量成正比。
試劑
1、飽和硼酸溶液
硼酸(H3BO3)6克,加蒸餾水100毫升,搖勻,放置過夜,取上清液應用。
2、飽和苯甲酸溶液
苯甲酸(C6H6COOH)250毫克,加蒸餾水100毫升,微熱使溶解,冷后應用。
3、單一試劑
冰醋酸 920毫升
硫脲 1.5克
鄰甲苯胺 80毫升
飽和硼酸 42毫升
充分混勻,置于棕色瓶內密閉,室溫保存,至少可穩定二個月。
4、葡萄糖標準儲存液56mmol/L (10mg/mL)
取無水純葡萄糖(AR)數克,置于潔凈燒杯內,于40-50℃烘干,置干燥器中至恒重。準確稱取此葡萄糖1.00克,以飽和苯甲酸溶液溶解并轉移入100毫升容量瓶內,再以飽和苯甲酸溶液稀釋至100毫升刻度處,置冰箱長期保存。
5、葡萄糖標準應用液5.6mmol/L(1mg/mL)
將葡萄糖標準儲存液用飽和苯甲酸溶液稀釋10倍即成。存室溫一個月穩定。
操作
血清葡萄糖測定操作步驟
加入樣本及試劑 |
測定管 |
標準管 |
空白管 |
血清 |
0.1 |
— |
— |
標準溶液(5.6mmol/L) |
— |
0.1 |
— |
蒸餾水 |
— |
— |
0.1 |
單一試劑 |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
混合后于沸水中準確煮沸8分鐘,取出后移至冷水中冷卻,用640nm或紅色濾光板比色,以空白管校正吸光度至0點,分別讀取各管吸光度。 |
注意事項
1、鄰甲苯胺的處理:鄰甲苯胺若顯紅棕色,則應重蒸餾,最好用全玻璃蒸餾器,切勿用橡皮塞(管)否則蒸餾時會使橡皮融熔。收集199-201℃餾出液,餾出液帶微黃色,蒸餾時去首尾部分。向蒸餾所得的鄰甲苯胺中按每500毫升加入0.5克鹽酸氫銨,置56℃水浴中加熱,不斷振搖,密塞避光儲冰箱備用。
2、煮沸時水面一定要蓋過管內液面,否則溫度不勻,影響顯色。
3、此法受煮沸時間、比色時間等因素的影響。一般不宜以標準曲線法進行計算,故每次應同時做標準管。
4、高脂血標本最后顯色的液體有時出現渾濁,影響結果。
5、鄰甲苯胺的濃度如增高,則吸光度也增高,故配制時濃度應保持一致。
6、鄰甲苯胺有毒,不可吸入其蒸汽,并不可沾染皮膚。平時應作為有毒試劑、避光,妥善儲存。
7、試劑酸度很大,嚴防對人身和儀器的損害。
8、標本應及時處理,以免糖分解影響結果。