ELISA技術檢測犬瘟熱病的中藥輔助治療臨床效果的研究

張永霞，王金福
(上海農林職業技術學院，上海)

[摘 要]
在前期應用中藥膠囊輔助治療犬瘟熱研究的基礎之上，本研究將上海三家寵物醫院2014~2016年就診的186只犬瘟熱病犬隨機分成兩組，第一組96只，僅用西藥治療。第二組90只，在西藥治療的基礎上用課題組研發的中藥膠囊進行輔助治療。后隨機選取64只(每組32只)，采集治療前和治療7天后的外周血血清中的犬瘟熱病毒抗原進行ELISA檢測。結果顯示：用藥前中藥輔助治療組的平均病毒含量高于單用西藥組，但經t檢驗后，P > 0.05，差異不顯著；用藥7天后中藥輔助治療組的平均病毒含量顯著低于單用西藥組，經t檢驗，P < 0.01，差異極顯著，表明中藥輔助治療能有效地殺滅犬瘟熱病毒。

[藥品]
中藥膠囊中的中藥生石膏、黃芩、黃連等均從上海余天成藥店購買；犬六聯高免血清產自軍需大學獸醫學院生物制品研究中心；犬瘟熱單克隆抗體生產于北京世紀元亨動物防疫技術有限公司；診斷試紙為韓國瑞必診犬瘟快速診斷試紙。

[試劑]
犬瘟熱病毒(CDV)ELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司 [1]。

[ELISA檢測CDV濃度]
按照上海江萊生物科技有限公司的犬瘟熱病毒(CDV)ELISA試劑盒說明書進行檢測：從室溫平衡20 min后的鋁箔袋中取出96孔板；設置標準品孔，標準品的濃度依次為0、10、20、40、80、160 ng/ml，標準品孔各加不同濃度的標準品50 μL；樣品孔中加入待測樣本50 μL，空白孔不加；除空白孔外，標準品孔和樣品孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的待測抗體100 μL，用封板摸封住反應孔，37℃恒溫箱溫育60 min；棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350 μL)，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次；每孔加入A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min；每孔加入終止液50 μL，15 min內，在450 nm波長處測定各孔的OD值。以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，繪制標準曲線，得到直線回歸方程，將樣品的OD值帶入方程，計算出樣品的濃度。

[兩組治療前后CDV含量對比結果]
以治療情況為橫坐標，以兩組CDV濃度的平均值為縱坐標，繪制柱狀圖

[參考文獻]
[ 1 ] Yoshida, E., Iwatsuki, K., Miyashita, N., et al. (1998) Molecular Analysis of the Nucleocapsid Protein of Recent Isolates of Canine Distemper Virus in Japan. Veterinary Microbiology, 59, 237-244.?

[ 2 ] 李清艷. 動物傳染病學[M]. 北京: 中國農業科學技術出版社, 2008: 235-237.

[ 3 ] 高琳, 汪崇, 等. 中藥療法和干擾素對犬瘟熱治療效果的比較研究[J]. 現代畜牧獸醫, 2012(5): 44-47.

[備 注] [1]“江萊生物”10年以來一直致力于免疫學技術的積累與沉淀，目前江萊生物實驗室占地約3000平米，技術研發團隊50余人，配備了全球最先進的分析和檢測設備，我們通過自主創新以及與國內外的科研單位合作研發，不斷突破新技術，目前我們研發了上千種指標，質量成熟，并長期出口到歐美市場，贏得了眾多科研機構的認可 ...

[文獻下載]  ELISA技術檢測犬瘟熱病的中藥輔助治療臨床效果的研究.pdf