刺山柑總生物堿對系統性硬皮病小鼠基質金屬蛋白酶及其抑制劑的影響
康小龍，劉晶，何承輝，盧軍，楊俊玲
（1.新疆醫科大學附屬中醫醫院，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆維吾爾自治區藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830004）

【摘要】
目的 觀察刺山柑總生物堿對系統性硬皮病（SSc）小鼠Ⅳ型膠原（Col-Ⅳ）、基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）和纖溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）水平的影響，探討其抗 SSc 組織纖維化的作用機制。方法 BALB/c 小鼠 90 只隨機分為空白對照組、模型組、青霉胺組及刺山柑總生物堿低、中、高劑量組。除空白對照組外，其余各組小鼠背部注射鹽酸博萊霉素建立 SSc 模型。成模后刺山柑總生物堿組小鼠背部外敷不同劑量刺山柑總生物堿乳膏，青霉胺組予青霉胺灌胃，空白對照組、模型組背部外敷不含藥基質，每日 1 次，連續 60 d。末次給藥后，ELISA 檢測小鼠皮膚 Col-Ⅳ和血清 MMP-9、TIMP-1、PAI-1 含量。結果 與模型組比較，刺山柑總生物堿中、高劑量組小鼠血清 MMP-9 含量及 MMP-9/TIMP-1 比值升高，血清 TIMP-1 及皮膚 Col-Ⅳ含量降低（P＜0.05，P＜0.01），但對 PAI-1 水平無明顯影響（P＞0.05）。結論 刺山柑總生物堿可通過調節 MMP-9/TIMP-1 失衡，減少 Col-Ⅳ合成，改善 SSc 組織纖維化。

【動物】
 周齡清潔級 BALB/c 小鼠 90 只，體質量 18～24 g，新疆實驗動物研究中心，合格證號 SCXK（新）2003-0002，置于清潔級環境，普通飼料和水飼養。

【主要試劑與儀器】
小鼠 MMP-9 ELISA 試劑盒（批號 201502）、小鼠 TIMP-1 ELISA 試劑盒（批號 201502），小鼠 PAI-1 ELISA 試劑盒（批號E11030163），小鼠 Col-ⅣELISA 試劑盒（批號 201502），上海江萊生物科技公司 [1]；二辛可寧酸蛋白定量試劑盒（批號 20150223），江蘇碧云天生物技術研究所。酶標儀，美國賽默飛世爾科技公司。

【分組、造模與給藥】
實驗小鼠隨機分為空白對照組、模型組、青霉胺組（125 mg/kg）和刺山柑總生物堿低（225 mg/kg）、中（450 mg/kg）、高（900 mg/kg）劑量組，每組 15只，實驗前用剃毛刀將背部毛剃除。采用博萊霉素皮下注射制備 SSc 動物模型，造模組小鼠背部皮下注射 300 μg/mL，每日 1 次，每次 0.1 mL，共 4 周，觀察小鼠背部注射部位皮膚是否出現皮膚增厚、彈性變差等變化。4 周后，刺山柑總生物堿組小鼠背部外敷不同劑量的刺山柑總生物堿乳膏，青霉胺組給予青霉胺灌胃，空白對照組和模型組背部外敷不含藥基質，1 次/d，連續 60 d。

【對模型小鼠皮膚Ⅳ型膠原含量的影響】
與空白對照組比較，模型組小鼠皮膚 Col-Ⅳ含量明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，刺山柑總生物堿各劑量組和青霉胺組皮膚 Col-Ⅳ含量明顯降低（P＜0.01）。

【參考文獻】
[1] 曹越蘭,李欣,王群.槌果藤對硬皮病小鼠模型皮膚硬化抑制作用的實驗研究[J].中國中藥雜志,2008,33(2)：215-217.
[2] 曹越蘭,李欣,鄭敏.槌果藤對進行性系統性硬化癥患者成纖維細胞增殖和Ⅰ型膠原產生的影響[J].中國中藥雜志,2008,33(5)：560-562.
[3] 沈佚葳,王京,周平.阿維 A 對硬皮病小鼠的治療作用及機制研究[J].中國醫藥導報,2013,10(25)：20-22.
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[備 注] [1]“江萊生物”10年以來一直致力于免疫學技術的積累與沉淀，目前江萊生物實驗室占地約3000平米，技術研發團隊50余人，配備了全球最先進的分析和檢測設備，我們通過自主創新以及與國內外的科研單位合作研發，不斷突破新技術，目前我們研發了上千種指標，質量成熟，并長期出口到歐美市場，贏得了眾多科研機構的認可 ...

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